ihc conditioning
负的 控制
没有 一个 primary antibody, 没有 一个 secondary antibody, 或者 没有detecting reagents.
why 做 我的 负的 控制 显示 强
信号?
这 信号 是 预定的 至 非-明确的 交叉-reactivity 的
发现 reagents.
dilute 这 secondary ab.
改变 species 的 secondary ab.
发现 reagent 仅有的 是 omitted. intrinsic tissue
enzyme activity 是 interfering 和 这 reaction. treat
tissue 和 reaction 解决方案.
可能 导致 的 信号 trouble shooting
这 secondary ab 是 binding 非-specifically 至 这
tissue. 增加 0.1% tissue-明确的 serum 至 这
secondary ab.
primary ab 仅有的 是 omitted.
这 detecting reagents 是 binding 非-specifically 至
这 tissue. 块 tissue 和 发现 reagent.
这 secondary antibody 仅有的 是 omitted.
积极的 控制
一个 积极的 antibody 和 这 测试 tissue, 或者 这 测试 antibody 和 一个 积极的 tissue.
使用 一个 antibody 知道 至 react 和 这 测试 tissue, 或者使用 这 测试 antibody 和 cells 知道 至 包含
这 antigen. fixatives 将 有 减少 进入 的 这 antibody 至 这 antigen. 执行 微波 目标
retrieval 程序 或者 protease digestion.
why 做 我的 积极的 控制 有 非
信号?
在 大多数 具体情况, 这个 是 因为 这 antibody 是 不
优化 或者 这 tissue 是 不 adequately treated.
这 enzyme/基质 系统 是 有缺陷的 或者
incompatible.
这个 能 是 confirmed 用 performing 用 点 blot 测试.
可能 导致 的 非 信号 trouble shooting
Ab 将 是 too dilute.
titrate ab 至 决定 这 最佳的 dilution 那 给
这 最好的 信号-至-噪音 比率.
secondary ab 做 不 认识 这 primary
ab.
确保 secondary ab 是 directed 相反 这 species 的
primary ab, e.g. 反对-mouse secondary ab 为 mouse
primary ab
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